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    感覺態細胞的制備和注意事項

    點擊次數:6868  更新時間:2020-05-20
       經過一系列處理后,變為易于吸收外源DNA的狀態,稱為感覺態細胞
      表面正電荷增加,膜和壁的通透性增加,能夠非選擇性的吸附并攝取外源DNA。
      同時,由于感受態細胞結構不完整,敏感性增加,過于激烈的操作會使其破裂,因此操作時應注意動作輕柔。
     
      感覺態細胞在基因工程實驗中,經常要使用各種細胞進行DNA的轉化操作。轉化指同源、異源的“裸露”的DNA分子被細胞攝取并得到表達的基因水平轉移過程。制備是分子生物學研究中的一個重要環節,其制備質量的好壞直接影響到后續實驗工作的進行。
     
      注意事項:
      1.制作時應使用的玻璃器皿或塑料容器。洗刷這些玻璃器皿或塑料容器時應盡量洗凈。由于微量的洗滌劑或污染物都可能降低細胞的轉化效率,因此在洗刷完用于制作細胞的玻璃器皿或塑料容器后,用去離子水浸泡一晚,然后再充分洗凈。
     
      2.制作時使用的菌種,不應使用4℃或常溫保存的傳代細菌。應使用-70℃保存的菌種,在LB抗生素平板培養基上分級劃線培養后,挑取單菌落。使用這種菌種制作的感覺態細胞,能提高轉化效率。
     
      3.菌體的濃度是影響感受態效率高低的主要因素,適于本法的菌體濃度應在OD600值0.05-0.11之間。
     
      4.用于制備的菌體培養停止后要立即處理,不要將培養液過長時間室溫放置,在冰中放置時也不要時間過長。
     
      5.制備操作過程中,離心后棄上清時要盡量棄盡,否則會降低轉化效率。
     
      6.主要的轉化操作都是無菌操作,并且在冰上進行。
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